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免疫荧光应用|巨噬细胞在ibidi腔室载玻片通道载玻片中的培养处理

更新时间:2022-09-02   更新时间:2022-09-02   点击次数:917次

  小鼠巨噬细胞系RAW-264.7(生物安全等级2)在ibidi µ-Slides VI 0.4 和8孔腔室载玻片的培养方案。这是一个特殊的细胞系的例子,用于显示粘附时间,细胞密度和细胞形态的示范。本应用可根据您的具体实验要求进行调整。


  1.细胞培养与材料制备  

  在将细胞接种到玻片中之前,按照常规的方法培养细胞。  

  µ-Slide VI 0.4 :通道玻片和培养基,在37℃和5%CO2培养箱中培养过夜。这对于避免随着时间的推移出现气泡至关重要。为此,在50 ml器中填充适量的培养基,并轻轻地将瓶盖拧紧。在 µ-Slide 8孔载玻片开放孔井中,气泡可排出到大气中。  

  拆开µ-Slide的包装,把它放在µ-Slide支架上,并在准备细胞悬浮液时同时将盖子放在 Luer 适配器/孔上。


  2.播种细胞

  分离细胞:  

  吸出培养瓶中的培养基,并用PBS洗涤细胞一次。每75cm² 烧瓶中加入3-5 ml的Accutase,并将烧瓶放入培养箱中以加快分离速度。如果是RAW-264.7细胞系,则大约需要8分钟。使用Accutase分离的细胞存活率更高。  

  

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  2.1. 将细胞接种到µ-Slide VI 0.4中  

  在µ-Slide VI 0.4建议的细胞浓度:最终细胞数  0.3 x 10 5 cells/cm²,制备浓度6 x 10 5cells/ml。通过将移液器底部直接放在通道的入口上,将30 µl细胞悬浮液填充到每个通道中。将盖子盖在玻片上,在37°C和5%CO2下孵育半小时以固定细胞。 

  细胞贴壁后,分别用60 µl无细胞培养基填充储液池。 避免将移液器吸头直接指向通道的入口。将玻片放回培养箱中。  

  

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  图1:接种后一小时,在ibiTreat µ-Slide VI 0.4(货号80606)中的RAW-264.7  

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  图2: 在ibiTreat µ-Slide VI 0.4中的RAW-264.7,孵育24小时后  

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  图3:在ibiTreat µ-Slide VI0.4中的RAW-264.7,培养四天后

  

  2.2 将细胞播种在µ-Slide 8 well 中  

  

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  在µ-Slide 8 well建议的细胞浓度:最终细胞数 0.3 x 10 5 cells/cm² ,制备浓度 1.1 x 10 5 cells/ml。将300 µl 的细胞悬浮液注入各孔中。将盖子盖在玻片上,在37°C和5% CO2中孵育。不需要进一步添加培养基。

  

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  图4:在ibiTreat µ-Slide 8 well(货号:80826)中的RAW-264.7,播种后1小时  

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  图5: 在ibiTreat µ-Slide 8 well中的RAW-264.7,孵育24小时后

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  图6:在ibiTreat µ-Slide 8 well中的RAW-264.7,经过四天的培养

  

  为获得最佳的分布的匀的细胞,我们建议使用像µ-Slide VI 0.4 这样的通道载玻片。在8孔腔室载玻片中,细胞密度可能会在孔的整个表面上因点而异,具体取决于细胞播种过程中的处理。

  

  3. 免疫荧光染色  

  像往常一样为您的细胞固定和染色。  

  注意:在 µ-Slides 中染色时注意液体的处理  

  µ-Slide VI 0.4 :更换液体,先吸出两个储液池而不排空通道。 如果您使用的是真空设备,请注意不要将吸头直接放在通道的入口上。 用100 µl新溶液冲洗通道3次。 从一侧添加新的溶液,通过通道流入另一个储液池,然后从另一侧吸出,直到两个储液池都排空。注意通道永远不要干涸!  

  µ-Slide 8孔载玻片:在 µ-Slide 8孔中,无需特殊处理措施。像在任何其他培养皿或孔板中一样的交换液体。