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ibidi应用指南|免疫荧光实验

更新时间:2022-12-26   更新时间:2022-12-26   点击次数:808次

  免疫荧光(IF)是使用显微镜深入了解细胞结构和过程的有效方法,可评估特定蛋白质的表达和位置,使得免疫荧光成为科学家解决许多细胞生物学问题的工具。

  

  免疫荧光实验基于以下主要步骤:  

  1.特异性抗体与感兴趣的蛋白质结合。  

  2.荧光染料与这些免疫复合物偶联,以便使用显微镜观察感兴趣的蛋白质。  

  

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  内皮细胞中vWF的免疫荧光染色。肌动蛋白用phalloidin染色(绿色),细胞核用DAPI染色(蓝色)。

  

  区分直接和间接免疫荧光。在直接免疫荧光中,一抗直接偶联到荧光团(也称为荧光色素),便于处理和快速可视化。在间接免疫荧光中,使用特异性结合一抗的二级荧光团偶联抗体来可视化感兴趣的结。

  

  尽管di二种方法比直接免疫荧光更耗时,但它有几个显著的优势,比如它通常更便宜,因为二抗可以用于不同的一抗。此外,通过结合多个一抗和特定的二抗(每个抗体都用不同的荧光团标记),可以在单个样品中平行特异地显示多个蛋白质(多色免疫荧光)。  

  

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  免疫荧光染色:典型的工作流程

  

  每个免疫荧光染色方案由培养、固定、染色、成像四个主要步骤组成,可细分如下:  

  

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  免疫荧光染色是一种非常敏感的方法,可能需要排除故障《免疫英冠染色故障排除指南》。方案中的微小变化可能会导致不同的结果,而这些结果不再具有可比性。因此,在您的特定方案中精确地保持相同的条件是非常重要的(例如,细胞密度、抗体稀释度、培养温度和培养时间)。  

  

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  免疫荧光实验方案对比

  

  传统染色与ibidi方案染色

  

  当使用任何ibidi解决方案时,ibidi的免疫荧光染色方案比传统方案要简便快速的多。无需在松散的盖玻片上生长细胞,细胞可直接在ibidi玻片上生长和染色。  

  

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  用于免疫荧光应用的各种ibidi产品  

  

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