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可视化Transwell细胞趋化实验前的攻略指南

更新时间:2023-12-07   更新时间:2023-12-07   点击次数:398次

  细胞的趋化性被描述为细胞向趋化剂的定向迁移;趋化作用是无向的细胞迁移,在细胞经历趋化作用时,它们会因某种物质而改变细胞的迁移速度但不会改变其迁移方向。

  

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  开始实验前需要确认的问题:为了正确设置趋化性测定,需要先确认以下几个重要问题。

  

  1.您打算研究哪种细胞类型?

  

  了解您感兴趣的细胞类型--包括培养基要求和迁移速度--对于后续的检测计划至关重要。

  

  2.所分析的细胞类型的迁移速度是多少?

  

  虽然有些细胞迁移速度较慢(如肿瘤细胞或成纤维细胞),但其他类型的细胞(如白细胞)迁移速度非常快。细胞迁移速度将决定实验的持续时间和图像之间所需的间隔。此外,梯度稳定性必须足够高,以适应实验的总持续时间。ibidi µ -Slide Chemotaxis 细胞趋化载玻片适用于慢速和快速迁移细胞的趋化性分析。


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  3.培养基是什么?

  

  大多数细胞类型在含有胎牛血清(FCS)的培养基中培养,但它却含有许多可以影响细胞迁移的因素,因此可能会改变趋化性测定的结果。例如,趋化剂对细胞迁移的影响可以被FCS诱导的影响所掩盖。在开始测定之前逐渐降低培养基中的FCS浓度是克服这个问题的一种方法。此外,还开发了不含FCS的特殊无血清培养基。在开始测定之前,必须测试每种感兴趣细胞类型的最佳培养基成分。

  

  4.感兴趣的细胞类型的最佳接种密度是多少?

  

  接种密度取决于许多细胞因素,例如增殖速率、行为、形状、上皮或间充质状态以及对细胞与细胞接触的依赖性。此外,在确定最佳细胞接种密度时必须考虑实验持续时间。为了有足够的可追踪细胞,开始实验时密度不能太低。在实验结束时,单细胞应该是清晰可定义和可追踪的。考虑到这些因素,在开始趋化性测定之前,应分别确定每种细胞类型的最佳接种密度。

  

  5.应该进行多少次实验?

  

  通常,三到五次重复实验足以从趋化组和相应的对照组创建重要数据。每个实验应包含20-40个单细胞的跟踪数据,这可以使用低放大倍率显微镜物镜(例如5倍或10倍)来实现。

  

  6.应该进行2D或3D趋化性分析吗?

  

  大多数细胞自然嵌入3D矩阵中。在趋化性测定过程中在2D环境中培养它们可能会改变它们的行为和迁移能力。为了克服这个问题,可以将细胞嵌入模仿其自然环境的3D基质中,例如胶原蛋白、基质胶或其他水凝胶。而细胞趋化载玻片非常适合2D和3D实验。

  

  7.实验中必须包括哪些对照?

  

  为了正确分析趋化性实验,至关重要的是包括不含任何趋化剂的阴性对照 (-/-),以及整个室中含有趋化剂的阳性对照 (+/+)。

  

  在使用细胞趋化载玻片时,由于梯度以外的所有条件都是对称的,因此需要较少的控制测量。这允许相互独立地分析趋化性和趋化运动。在该实例中,趋化剂诱导癌细胞的趋化性和趋化运动。


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