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通道载玻片--新的免疫荧光方法

更新时间:2016-05-11   更新时间:2016-05-11   点击次数:2170次

细胞的免疫荧光实验是一个基础的细胞实验,传统的方法是在培养板中放入预先处理好的盖玻片,待细胞贴壁后,使用镊子将盖玻片拿出再开始进行固定,染色等系列工作。

 

现在分享一种简便的免疫荧光方法,无需爬片,培养-操作-镜检,在一个培养皿/载玻片上完成所有工作!一气呵成!

使用如图的培养皿和载玻片,免疫荧光步骤将简化为:

1.直接细胞培养

2.冲洗玻片/培养皿

3.固定细胞

4.冲洗玻片/培养皿

5.染色

6.冲洗玻片/培养皿

7.冻存液处理细胞

8.直接镜检观察

 

免去了指甲油封片的传统免疫荧光方法中的冗长步骤:

1.无需对盖玻片和载玻片消毒灭菌

2.无需对盖玻片进行包被

3.无需等细胞爬片

4.无需指甲油封片

 

之所能如此简便完成免疫荧光实验,是因为这些ibidi培养皿和载玻片的底部为特殊处理的材质,绝大多数细胞可以直接贴壁生长,而不需要另外包被。同时,这些耗材的底部薄如盖玻片,可以直接使用倒置显微镜进行观察,得到高质量的成像,适用于显微镜比如共聚焦显微镜。

成像效果:

  

 

下面再分享一种的免疫荧光方法,不仅更加简化实验步骤,而且可以节约试剂和细胞,同时还能得到更出色的成像效果。

 

如图的ibidi通道载玻片,简单快速完成免疫荧光实验

步骤:培养-固定-染色-镜检,只需在这个载玻片上进行4个步骤,免疫荧光实验轻松完成~

优点总结:

1、节约细胞和试剂

ibidi通道载玻片里的通道只有400μm高,以μ-slide VI为例,通道的容积只有30μl,而普通8well的腔式载玻片一个孔的容积有300μl。这意味着通道需要的试剂和细胞量仅需约十分之一!对于非常珍贵的细胞和试剂来说,这可是非常重要的。

 

2、成像效果好

使用通道载玻片时,能在相差显微镜下获得更好的成像效果。因为通道上下都是平坦的,不会因为凹液面的折射现象影响到相差显微镜成像。而well式的开放小室的相差成像会受到培养皿盖和液面的折射现象影响。

 

 

3、细胞分布均匀

在通道载玻片中,由于没有培养皿壁的影响,铺入细胞后,不需要平时的混匀操作,细胞的分布就非常均匀了。而使用开放小室,有可能在铺细胞混匀后,细胞还是会聚集在小室的边缘或上。如下图所示。a 是明场相差成像,b为荧光成像。

 

 

免疫荧光本身就是个十分基础的实验,如今的科技更是便利了实验,实验也发展了科技。

以上方法分享给有需要的,奔跑在科研前沿的童鞋们~更快更省地做好免疫荧光噢!