在本应用示例中,我们展示了如何从μ-Slide VI 0.4通道载玻片中洗脱培养后的贴壁细胞。该方法适用于不同规格的通道载玻片。
1.根据实验说明将您的细胞培养到所需的汇合度。
装有细胞和培养基的μ-Slide VI 0.4
2.从μ-Slide VI 0.4通道载玻片的通道口中取出培养基,不要吸干整个通道。
3.用PBS或任何其他适当的缓冲液清洗两次,然后从另一端吸出。每个通道使用体积为100μl。我们建议同时使用细胞培养吸引器和移液器。如图所示,使用吸引器的尖尖位置和移液器(如图)。
µ-Slide VI 0.4的一个通道的横截面显示了PBS洗涤步骤
4.使用细胞培养吸液器从通道中吸出全部PBS,在这个步骤中,缓冲液从容器口和通道中*去除
5.立即用30μl分离溶液(例如胰蛋白酶/EDTA或Accutase)重新填充通道。如图所示,将移液器吸头直接放在通道的入口上。将30µl分离溶液填充到空通道中。
6.再将您的细胞放入培养箱中。由于生长面积和体积的纵横比不同,分离过程可能需要比平时更长的时间(2-3分钟)。用相差显微镜观察细胞脱离。如果没有发生分离,请增加分离溶液的浓度或使用更长的孵育时间。细胞会在几分钟后分离。
7.细胞成圆形并分离后,用100μl新鲜培养基或终止溶液冲洗每个通道。分离的细胞被100µl新鲜培养基冲出通道。
8.从通道的另一端取出细胞悬液。如果还剩一些细胞,请重复冲洗步骤。
9.收集悬浮细胞并去除或稀释分离溶液
在细胞悬浮后,可以通过从通道中吸出溶液来收集