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ibidi可移除腔室载玻片的一片高效多功能应用

更新时间:2023-06-14   更新时间:2023-06-14   点击次数:662次

  Ibidi 3孔/8孔/12孔可移除腔室载玻片为实验培养MCF-7细胞提供了一种简单且高效的实验方案~

  

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  实验方案:

  

  细胞培养,固定,染色和成像观察--都是在一个开放型小室中搞定:


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  实验步骤1:

  

  必须在预实验中确定细胞系的正确接种浓度。根据您的细胞类型,用4-6x104细胞/ ml在2-3天内产生汇合的单层。

  

  1.在无菌条件下,打开8孔可移除腔室载玻片(ibidi,80841)包装。

  

  2.像往常一样用胰蛋白酶消化并计数细胞。细胞浓度为5×104细胞/ ml MCF-7。

  

  3. 将400微升细胞悬浮液加入腔室的每个孔中。避免摇晃,因为这会导致细胞分布不均匀。

  

  4. 用配套的盖子盖住。在37°C和5%CO2下培养。细胞至少培养24小时,或直到建立融合的单层。

  

  实验步骤2:

  

  固定是染色程序的第一步。目标是将细胞,细胞形成物或组织维持在其当前状态,并在较长时间内通过化学试剂保存。

  

  1.小心地吸出细胞培养基。

  

  2.用PBS洗两次。

  

  3.加入400μl福尔马林溶液。

  

  4.在室温下孵育30分钟。

  

  5.小心吸入福尔马林溶液。

  

  6.用PBS洗涤三次。

  

  实验步骤3:

  

  应根据感兴趣的细胞结构选择染色试剂。在该方案中使用DAPI和DYE-490鬼笔环肽染色MCF-7细胞的细胞核和肌动蛋白骨架。

  

  1.准备你的染色溶液:PBS、DYE-490鬼笔环肽、DAPI 1μg/ml

  

  2.小心吸出PBS。

  

  3.移取400μl染色溶液到每个孔中

  

  4.在室温下避光孵育30分钟

  

  实验步骤4:

  

  染色后清洗样本可最大限度地减少背景信号

  

  1.小心地吸出染色溶液

  

  2.加入400μl缓冲液

  

  3.小心地吸出缓冲液

  

  4.重复步骤2和步骤3至少一次

  

  实验步骤5:

  

  从一个边缘开始,用手或用镊子小心地取下硅胶垫圈。该步骤应以缓慢,稳定的进行,以避免损坏细胞层。  

  

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  实验步骤6:

  

  完成染色程序后,必须在用显微镜成像之前封固样品。该步骤还可防止样品脱水。

  

  1.将载玻片侧面在干净的实验室湿巾上轻敲,去除样品中多余的介质。

  

  2.将封固剂涂在样品上。用24 x 60毫米的盖玻片覆盖安装好的样品,小心地将盖玻片放到安装介质上,以避免夹住任何气泡。Tip:建议使用硬化封片剂,如FluoroshieldTM (Sigma-Aldrich), Vectashield? (Vector Laboratories Inc.), or ProLong Antifade? (ThermoFisher Scientific)。

  

  3.等封片剂固定好。  

  

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  实验步骤7:显微观察  

  

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  在可移除8孔腔室载玻片中免疫染色的MCF-7细胞的荧光显微镜检查。绿色:α-微管蛋白,红色:F-肌动蛋白(鬼笔环肽),蓝色:细胞核 (DAPI)。使用20倍物镜拍摄宽场荧光图像。


  ibidi提供了一种简单且经济高效的方案,使用一片可移除的腔室载玻片可进行细胞的培养,固定和染色,无需爬片,是倒置/正置显微镜以及长期样品储存的理想选择。


  订购信息:

  

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