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提取动物关节软骨组织总RNA

更新时间:2016-09-19   更新时间:2016-09-19   点击次数:2154次

提取动物关节软骨组织总RNA

 

实验目的

       研磨破碎软骨组织(大鼠膝关节软骨),提取其总RNA。

 

实验原理

       充分磨碎软骨样品(大鼠膝关节软骨),再用相关试剂提取其总RNA。

 

实验材料和器具

样品:大鼠膝关节软骨

仪器:多样品组织研磨仪(上海净信,Tissuelyser-24)

耗材:研磨罐(上海净信,***ml),研磨珠(上海净信,***mm,***颗)

试剂:液氮若干

 

实验步骤

1.研磨软骨组织

1.1 取适量大鼠膝关节软骨组织剪切成约***立方厘米小块;

1.2 将小块软骨组织置于液氮***分钟或放入***度冰箱冷冻30分钟;

1.3 将样品和研磨珠放入研磨罐,盖好盖子;

1.4 将装好样品及钢珠的研磨管,放入已经在***度冰箱预冷好的适配器中,加入变性液,β-巯基乙醇

1.5 将适配器放入净信研磨仪中在***hz条件下,研磨***min,可得到匀浆状的软骨组织;

2.总RNA提取

2.1 冰水浴下,加酸性水饱和酚,摇匀,加醋酸钠,异戊醇混合液,冰水浴上***min;

2.2 ***℃下,离心,取上清液,加异戊醇混合液,离心取上清,加异丙醇,***℃下沉淀,离心,得到凝胶状RNA和蛋白多糖混合沉淀,加无RNA酶水,溶解得胶状溶液;

2.3 取胶状溶液用plant RNAout试剂盒的RNA提取步骤得到总RNA沉淀,取沉淀,乙醇洗涤后用无RNA酶水溶解沉淀,即得关节软骨组织总RNA溶液。

 

实验结果

       采用本实验方法提取的动物关节软骨组织总RNA的收率高,并且纯度高、质量、完整性好,可以满足分子生物学研究应用。

                     总RNA甲醛变性胶电泳结果

          Ⅱ型胶原PCR扩增产物电泳结果