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共培养迁移实验|周细胞与肺微血管内皮细胞共培养迁移试验

更新时间:2022-09-02   更新时间:2022-09-02   点击次数:771次

  应用Ibidi伤口愈合插件进行共培养“伤口愈合"实验,对周细胞与肺微血管内皮细胞做共培养迁移试验。

  

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  实验步骤:

  

  1)铺细胞(图二)  

  将ibidi伤口愈合培养皿底部的保护胶带撕除。在ibidi细胞插件的每孔中分别加入1.5 ×104的PMVECs和Pericyte的细胞悬液。注意不要大力晃动培养皿。以防止细胞不均匀。在37℃培养箱中孵育  

  

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  图二,ibidi伤口愈合插件中加入细胞

  

  2)形成“划痕"  

  采用无血清培养基饥饿细胞16小时。如图四所示,小心的用镊子夹住插件的一个角,将插件移除。  

  

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  图三,移除插件

  

  移除插件后,要用显微镜检查是否形成合格的“划痕"。  

  小心的清洗细胞,之后加入2ml培养基进行培养(图四)  

  

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  采集并分析图像:  

  在显微镜下选取能同时看到“划痕"和两边细胞的视野进行成像,“划痕"的方向最好是水平或者垂直。  

  采集0h和6h的图像,观测细胞的迁移率和细胞迁移方向,用中性粒周蛋白定位微管生长中心(MTOC)并用鬼笔环肽标记F-actin  

  

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  由图可见,相对于左侧的对照,右边的PAH来源的Pericytes迁移距离较短,并且从荧光标记图上可见,红色箭头表示迁移的方向,PAH组无特定方向,不受PMVEC的影响。柱状图为统计结果。