共培养迁移实验|周细胞与肺微血管内皮细胞共培养迁移试验

　　应用Ibidi伤口愈合插件进行共培养“伤口愈合"实验，对周细胞与肺微血管内皮细胞做共培养迁移试验。

　　实验步骤:

　　1）铺细胞（图二）　　

　　将ibidi伤口愈合培养皿底部的保护胶带撕除。在ibidi细胞插件的每孔中分别加入1.5 ×104的PMVECs和Pericyte的细胞悬液。注意不要大力晃动培养皿。以防止细胞不均匀。在37℃培养箱中孵育　　

　　图二，ibidi伤口愈合插件中加入细胞

　　2）形成“划痕"　　

　　采用无血清培养基饥饿细胞16小时。如图四所示，小心的用镊子夹住插件的一个角，将插件移除。　　

　　图三，移除插件

　　移除插件后，要用显微镜检查是否形成合格的“划痕"。　　

　　小心的清洗细胞，之后加入2ml培养基进行培养（图四）　　

　　采集并分析图像：　　

　　在显微镜下选取能同时看到“划痕"和两边细胞的视野进行成像，“划痕"的方向最好是水平或者垂直。　　

　　采集0h和6h的图像，观测细胞的迁移率和细胞迁移方向，用中性粒周蛋白定位微管生长中心（MTOC）并用鬼笔环肽标记F-actin　　

　　由图可见，相对于左侧的对照，右边的PAH来源的Pericytes迁移距离较短，并且从荧光标记图上可见，红色箭头表示迁移的方向，PAH组无特定方向，不受PMVEC的影响。柱状图为统计结果。