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ibidi24孔预置插件培养板|高通量细胞迁移实验解决方案

更新时间:2022-09-09   更新时间:2022-09-09   点击次数:785次

  此次实验便是应用了ibidi Culture-Insert 2 Well 在24孔培养板上分析MCF-7细胞迁移实验的详细方案,为伤口愈合实验提供了完整的解决方案,并进行测试了五种不同浓度的人表皮生长因子(hEGF)对迁移行为的影响并与对照条件进行比较。

  

  实验工作流程:

  

  3.1 步骤1:细胞接种  

  正确的接种浓度是一个关键参数,因为24小时后应达到汇合的单层。需要进行预实验以确定所用细胞系的最佳浓度。

  1. 取下附在μ-Plate底部的保护膜。 

  2. 像往常一样准备细胞悬液。建议包括离心步骤以去除死细胞和细胞碎片。将MCF-7细胞悬浮液调节至细胞浓度为5×105细胞/ml。  

  3. 将70μl细胞悬浮液应用于2孔的培养插件每个孔中。避免摇动μ-Plate,因为这会导致细胞分布不均匀。  

  4. 将细胞在37°C和5%CO2培养至少24小时。  

  

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  图2在开始细胞接种步骤(A)之前取下保护膜。将70μl细胞悬浮液填充到2孔培养插件(B)的每个孔中。

  

  3.1 步骤2:划痕形成

  μ-Plate 24 Well的使用并行测试五种不同的hEGF浓度和对照条件。每种实验条件可以进行四次技术重复. 

  1. 在显微镜下观察培养24小时后的细胞密度。如果24小时后未达到融合细胞单层,则将μ-Plate于细胞培养箱中再培养几个小时。定期检查汇合点。  

  2. 将生长因子添加到细胞培养基中以获得以下浓度:0,5,10,20,30和40ng / ml EGF。  

  3. 用无菌镊子轻轻取出2孔培养插件。要移除培养插件,请抓住一个角,如图3所示。  

  4. 用无细胞培养基或PBS洗涤细胞层以除去细胞碎片和未附着的细胞。  

  5. 小心吸出无细胞培养基或PBS。 

  6.用移液管将1ml细胞培养基加到24孔板的每个孔中。

  

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  图3使用无菌镊子取出2孔培养插件

  

  3.1 步骤3:获取显微镜图像  

  我们建议录制延时视频,以确定时间依赖性和细胞迁移的特征。  

  1. 将μ-Plate 24孔培养板放在显微镜上并确定所有24个孔的位置。  

  2. 在接下来的几个小时内多次拍摄图像,开始观察过程。在24小时内每30分钟拍摄一次图像。  


  4.结果 

  分析显微图像以获得关于培养细胞迁移特征信息。分析细胞覆盖区域随时间的变化来确定细胞速度。

  

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  图4 hEGF对MCF-7细胞迁移行为影响的比较。测试了四种不同的EGF浓度,并与对照实验进行了比较。

  

  使用Culture-Insert 2 Well 在24孔培养板上进行测试六种不同(或更多)的条件。通过比较细胞速度与对照条件的速度来分析五种不同hEGF浓度(每种重复四次)的影响。实验数据显示,与对照组相比,hEGF增加了MCF-7细胞的细胞速度。如图4所示,hEGF> 10ng / ml的浓度显示细胞速度没有进一步增加。